Transfecção de DNA de BoHV-5 com fosfato de cálcio em diferentes tipos de cultivos celulares

Authors

  • Eduardo Bortoluzzi Dornelles UFRGS
  • Franciscus Antonius Maria Rijsewijk UFRGS
  • Paulo Michel Roehe UFRGS
  • Amauri Braga Simonetti UFRGS

DOI:

https://doi.org/10.22456/1679-9216.16481

Keywords:

BoHV-5, Fosfato de cálcio, Transfecção, Células de testículo de terneiro

Abstract

As condições para uma transfecção eficaz pelo método de fosfato de cálcio podem variar substancialmente. Neste estudo foi testado o tipo de cultivo celular mais apropriado para transfecção de DNA de herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5) por esta técnica. Primeiramente foi avaliada a capacidade de multiplicação do BoHV-5 em três diferentes tipos de células. Para isto, a concentração viral foi calculada pelo método de dose infectante para cultivo celular / 50% (TCID

 

 

50/mL). O BoHV-5 foi titulado em células de linhagem de rim de macaco verde Africano (VERO), células de linhagem de rim de suíno (PKsC3), células primárias de testículos de terneiro (TT) e células de linhagem de rim de bovino (MDBK). Em células VERO e PKsC3 a concentração viral máxima obtida foi 103,3 TCID50/mL, enquanto que em células MDBK o título foi de 106,8 TCID50/mL, similar ao encontrado para as células TT. Para avaliar a eficácia da transfecção nessas células, foi utilizado DNA plasmideal expressando um gene repórter (EGFP). Os resultados mostraram um valor de 4,5% de células fluorescentes para células TT, de 2,9% para PKsC3, de 0,5% para VERO e de 0,05% para MDBK. Quando células PKsC3 e TT foram transfectadas com 0,5 ?g de DNA purificado de BoHV-5, somente as células TT apresentaram resultado positivo, com duas placas virais por poço. Para investigar a influência da concentração de DNA viral, células TT foram transfectadas com 0,5 ?g e 1 ?g de DNA purificado de BoHV-5, produzindo duas e quatro placas, respectivamente. Nas condições experimentais testadas neste estudo os resultados indicam que as células TT poderiam ser boas candidatas para serem utilizadas para a transfecção de DNA de BoHV-5.

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Author Biographies

Eduardo Bortoluzzi Dornelles, UFRGS

Franciscus Antonius Maria Rijsewijk, UFRGS

 

 

 

Laboratório de Virologia, Departamento de Microbiologia, ICBS-UFRGS.

Paulo Michel Roehe, UFRGS

 

 

 

Laboratório de Virologia, Departamento de Microbiologia, ICBS-UFRGS.

 

 

 

Laboratório de Virologia, Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (CPVDF), FEPAGRO, Eldorado do Sul, RS, Brasil. Pesquisador 1C do CNPq.

Amauri Braga Simonetti, UFRGS

 

 

 

Programa de Pós-graduação em Microbiologia Agrícola e do Ambiente (PPGMAA), Instituto de Ciências Básicas da Saúde (ICBS), Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS)

Published

2018-06-27

How to Cite

Dornelles, E. B., Rijsewijk, F. A. M., Roehe, P. M., & Simonetti, A. B. (2018). Transfecção de DNA de BoHV-5 com fosfato de cálcio em diferentes tipos de cultivos celulares. Acta Scientiae Veterinariae, 38(1), 31–35. https://doi.org/10.22456/1679-9216.16481

Issue

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