Investigação Molecular para a Presença de Monkeypoxvirus (MPXV) em um Macaco Bebê

Resumo

Antecedentes: Monkeypox é um vírus zoonótico que transmite de animal para humano e de humano para humano. Apesar do vírus Monkeypox (MPXV) ter sido inicialmente isolado em 1958 e o primeiro caso humano ter sido relatado em 1970, milhares de casos foram documentados em países europeus, nos Estados Unidos e na Turquia nos últimos anos. O objetivo deste trabalho foi apresentar os resultados da primeira análise de diagnóstico molecular de lesões cutâneas induzidas por MPXV em um bebê macaco na Turquia.
Caso: Em 2019, um bebê macaco no Zoológico de Antalya desenvolveu lesões na pele após ser trazido da África por uma macaca. O bebê macaco morreu em poucas semanas devido a problemas respiratórios pós-natais. As lesões cutâneas foram retiradas deste caso e analisadas molecular e virologicamente no Departamento de Patologia da Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade Burdur Mehmet Akif Ersoy e no Departamento de Virologia. Para realizar o diagnóstico molecular, foram extraídas lesões cutâneas e pústulas desenvolvidas após a inoculação na membrana corioalantóide (CAM) dos ovos embrionados de galinha (ECE), e vinte e cinco primers específicos do tipo parapoxvírus (orf virus) e dois primers específicos do tipo MPXV foram examinados. O inóculo foi preparado a partir das lesões cutâneas para isolamento do vírus, que foi realizado em cultura de células Vero. Em seguida, o título do vírus foi determinado pelo método de microtitulação. O teste de PCR com 25 primers específicos para o tipo de parapoxvírus (orf vírus) nas amostras extraídas de lesões cutâneas não detectou a presença de genoma viral. A presença do genoma viral foi detectada em um dos dois primers específicos do tipo MPXV de corpos de inclusão do tipo acidófilo (gene ATI) nos extratos de lesões cutâneas. No entanto, a presença do genoma viral não pôde ser determinada pelos primers Gabão (1/2). Os efeitos citopatológicos (CPE) foram observados 72 horas após a inoculação do inóculo da lesão cutânea em células Vero. O título do vírus foi determinado em 1022 TCID50/ml. Durante o exame imuno-histoquímico com anticorpos do vírus orf, observou-se reação positiva nas células epidérmicas.
  Discussão: Os pesquisadores têm investigado o reservatório ou hospedeiros naturais do MPXV. O vírus foi encontrado em esquilos, roedores, macacos e chimpanzés. Múltiplos exames revelaram que várias espécies animais, principalmente roedores e primatas não humanos, são suscetíveis ao vírus. A presença de MPXV foi detectada na lesão de pele de um macaco bebê no estudo. Capripoxvirus, Cervidpoxvirus, Avipoxvirus, Molluscipoxvirus, Orthopoxvirus, Leporipoxvirus, Suipoxvirus, Yatapoxvirus e Parapoxvirus são todos membros do subgrupo Chordopoxvirinae. No entanto, nenhuma relação entre MPXV e parapoxvírus (25 primers específicos do tipo) foi encontrada nas amostras de lesões cutâneas extraídas. Isolamento do vírus, microscopia eletrônica, reação em cadeia da polimerase (PCR), IgM e IgG ELISA, ensaios de imunofluorescência e exame histopatológico são procedimentos diagnósticos laboratoriais que podem ser usados ​​para diagnosticar infecções por varíola dos macacos. Para detectar o agente MPXV e/ou sequências específicas de DNA viral, técnicas de PCR em tempo real ou tradicionais devem ser utilizadas. A hemaglutinina, o gene ATI e o gene crmB são todos genes MPXV comumente usados ​​para testes de PCR convencionais. Um primer específico do tipo MPXV (gene ATI) observou a presença do genoma viral no extrato da lesão cutânea. Após a inoculação do inóculo da lesão cutânea em células Vero, foram observados efeitos citopatológicos (CPE). O título do vírus foi encontrado extremamente alto. Reações positivas foram observadas em células epidérmicas durante o teste imuno-histoquímico com anticorpos do vírus orf.