Avaliação da possibilidade de ocorrência de transformação natural de Azospirillum brasilense com DNA de plantas contendo o gene de resistência à canamicina

Abstract

Existe uma grande preocupação sobre a possibilidade de transferência horizontal de genes de resistência a antibióticos de plantas geneticamente transformadas para bactérias presentes nos solos. Um mecanismo de transferência gênica em bactérias, que permite a aquisição de material genético proveniente de espécies diferentes, é a transformação natural. Nesse trabalho, Azospirillum brasilense, uma bactéria fixadora de nitrogênio, foi utilizada como receptora para a transformação natural. Plantas de tabaco transgênicas, contendo o gene nptII (resistência à canamicina) foram utilizadas como doadoras de material genético. Um período de contato de 12 meses entre as plantas transgênicas e as bactérias foi avaliado, com coletas amostrais a cada dois meses, através de análises por PCR do DNA extraído de películas bacterianas formadas em meio seletivo NFbHP. As reações de PCR foram realizadas com oligonucleotídeos específicos para os genes nptII e nifH. Nenhuma banda de amplificação correspondente ao gene nptII foi observada até o final do experimento. Os fragmentos amplificados a partir da reação para o gene nifH foram clivados com TaqI, para confirmar a presença de A. brasilense nas culturas. As bactérias também foram espalhadas em placas contendo meio NFbHP e canamicina e não foram observadas colônias após um período de 72 h de incubação. Do contrário, nas placas contendo apenas ampicilina as colônias foram similares àquelas obtidas com as placas controle. Os resultados obtidos poderão ser úteis na elaboração de um protocolo de monitoramento de possíveis efeitos de plantas trasgênicas nos microrganismos do solo.