Expression of recombinant buck (Capra hircus) spermadhesin in a prokaryotic system

Authors

  • João Batista Cajazeiras
  • Antônia Sâmia Fernandes do Nascimento
  • Luciana Magalhães Melo
  • Érica Souza Albuquerque
  • Gandhi Rádis-Baptista
  • Vicente José de Figuêiredo Freitas
  • Benildo Sousa Cavada

Keywords:

semen, recombinant protein, cDNA

Abstract

The low purification efficiency and the incomplete characterization of buck spermadhesins (Bdhs) prompted us to establish an effective system to produce recombinant Bdhs (rBdhs). The Bdh-4 cDNA was inserted in a prokaryotic expression plasmid pTrcHis TOPO to produce a His6 fusion protein in E. coli Top10 cells. The recombinant clones were selected by growth in ampicillin-containing medium, PCR amplifications and nucleotide sequencing. The recombinant protein synthesis was monitored by SDS-PAGE followed by immunoblotting using a monoclonal anti-His antibody. The expression of the rBdh-4 was achieved at 0.1 to 2.0 mM IPTG after 2 to 6 h of induction. A greater production of rBdh-4 (P < 0.001) was obtained with 0.1 mM IPTG after 2 h of induction. The apparent molecular weight of rBdh-4 was 15.85 ± 0.09 kDa. This result agrees with the theoretical molecular weight of 16.5 kDa predicted from the nucleotide sequence. In conclusion, an effective rBdh-4 expression system was established in order to provide a good tool for studying the biofunctions of buck spermadhesins.

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Author Biographies

João Batista Cajazeiras

possui graduação em Agronomia pela Universidade Federal do Ceará (1996) , mestrado em Pós Graduação Em Bioquímica Vegetal pela Universidade Federal do Ceará (2000) e doutorado em Ciências Veterinárias pela Universidade Estadual do Ceará (2009) . Atuando principalmente nos seguintes temas: Bodesinas, espermadesinas. 26/08/10

Antônia Sâmia Fernandes do Nascimento

Aluna do curso de Pós-graduação/Doutorado em Bioquímica Vegetal da Universidade Federal do Ceará (UFC). Possui graduação em Ciências Biológicas (2007) pela Universidade Estadual do Ceará (UECE) e mestrado em Biotecnologia (2010) pela UFC. Tem experiência nas áreas de bioquímica (isolamento e purificação de lectinas) e biologia molecular (clonagem e expressão de lectinas).

Luciana Magalhães Melo

Possui graduação em Medicina Veterinária pela Universidade Estadual do Ceará (2001), mestrado em Ciências Fisiológicas pela Universidade Estadual do Ceará (2004) e doutorado em Bioquímica pela Universidade Federal do Ceará (2007). Tem experiência nas áreas de Bioquímica e Biologia Molecular, com ênfase em reprodução e sanidade animal. Atualmente realiza pós-doutorado em Biotecnologia Molecular aplicada às Ciências Veterinárias através do Programa Nacional de Pós-doutoramento (PNPD) da CAPES. Professora colaboradora da disciplina de Biologia molecular do Programa de Pós-graduação em Ciência Veterinárias (PPGCV, curso nível 6, segundo avaliação da CAPES). Membro docente das comissões de Seminários em Tópicos Especiais e de Qualificação, do doutorado em Ciências Veterinárias do PPGCV. Coordenadora de Comunicações de Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões (SBTE).

Érica Souza Albuquerque

Graduanda em Medicina Veterinária na Universidade Estadual do Ceará (UECE). Atua na área de Biotecnologia aplicada à reprodução de pequenos ruminantes.

Gandhi Rádis-Baptista

Graduado em Farmácia Bioquímica pela Universidade de São Paulo (1993), é mestre em Tecnologia Bioquímico-Farmacêutica pela Universidade de São Paulo (1996) e doutor em Bioquímica pela Universidade de São Paulo (2001). Foi professor adjunto do Departamento de Bioquímica da Universidade Federal de Pernambuco (2005-2008). Atualmente é professor adjunto do Instituto de Ciências do Mar da Universidade Federal do Ceará. Tem experiência na área de Bioquímica, com ênfase em Biologia Molecular e Química de Proteínas. Os principais interesses de investigação compreendem: os polipeptídeos farmacologicamente ativos, provenientes de organismos marinhos e terrestres; os receptores celulares e seus ligantes; a interação molecular; a tecnologia do DNA recombinante; o diagnóstico molecular e seus insumos.

Vicente José de Figuêiredo Freitas

Vicente José de Figueirêdo Freitas é médico veterinário formado pela Universidade Estadual do Ceará e concluiu o doutorado em Sciences de La Vie - Université François Rabelais (Tours-França) em 1996. Atualmente é professor adjunto da Universidade Estadual do Ceará. Publicou vários artigos em periódicos especializados (nacionais e internacionais). Possui capítulos de livros e livros publicados. Recebeu diversos prêmios e/ou homenagens. Atualmente coordena quatro projetos de pesquisa. Atua na área de Reprodução e Transgênese Animal. Em suas atividades profissionais interagiu com centenas de colaboradores em co-autorias de trabalhos científicos. Sua produção científica e tecnológica está principalmente ligada aos termos: caprino, embrião, transgênese, superovulação, transferência de embriões e reprodução.

Benildo Sousa Cavada

Gradução: Agronomia (UFPel, 1976); Mestrado Bioquímica Vegetal (UFC, 1980); Doutorado Biquímica Vegetal (Universite Paul Sabatier, Toulouse-França, 1985); Área de Atuação: Biologia Estrutural (proteínas); Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular da UFC

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Published

2012-03-18

How to Cite

Cajazeiras, J. B., Nascimento, A. S. F. do, Melo, L. M., Albuquerque, Érica S., Rádis-Baptista, G., Freitas, V. J. de F., & Cavada, B. S. (2012). Expression of recombinant buck (Capra hircus) spermadhesin in a prokaryotic system. Revista Brasileira De Biociências, 10(1), 60. Retrieved from https://seer.ufrgs.br/index.php/rbrasbioci/article/view/115603

Issue

Vol. 10 No. 1 (2012)

Section

Artigos