Expression of recombinant buck (Capra hircus) spermadhesinin a prokaryotic system

Autores

  • João Batista Cajazeiras
  • Antônia Sâmia Fernandes do Nascimento
  • Luciana Magalhães Melo
  • Érica Souza Albuquerque
  • Gandhi Rádis-Baptista
  • Vicente José de Figuêiredo Freitas
  • Benildo Sousa Cavada

Palavras-chave:

sêmen, proteína recombinant, cDNA.

Resumo

(Expressão da espermadesina recombinante de bode (Capra hircus) em sistema procariótico). A baixa eficiência de purificação e a incompleta caracterização das espermadesinas de bode (Bdhs) nos levou a estabelecer um sistema efetivo para produzir as Bdhs recombinantes (rBdhs). O cDNA da Bdh-4 foi inserido no plasmídeo de expressão procariótico pTrcHis TOPO para produzir uma proteína de fusão His6 em células de E.coli Top10. Os clones recombinantes foram crescidos em meio contendo ampicilina, amplificação por PCR e sequenciamento de nucleotídeos. A síntese da proteína recombinante foi monitorada por SDS-PAGE seguida por imunobloting usando anticorpo monoclonal anti-His. A expressão da rBdh-4 foi conseguida de 0,1 a 2,0 mM de IPTG e depois de 2 a 6 H de indução. A maior produção da rBdh-4 (P<0,001) foi obtida com 0,1 mM de IPTG depois de 2 h de indução. O peso molecular aparente da rBdh-4 foi 15,85 ± 0.09 kDa. Este resultado está de acordo com o peso molecular teórico de 16,5 KDa predito pela sequencia de nucleotídeos. Em conclusão, um sistema efetivo de expressão da rBdh-4 foi estabelecido para fornecer uma boa ferramenta para estudos biofuncionais das espermadesinas de bode.

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Biografia do Autor

João Batista Cajazeiras

possui graduação em Agronomia pela Universidade Federal do Ceará (1996) , mestrado em Pós Graduação Em Bioquímica Vegetal pela Universidade Federal do Ceará (2000) e doutorado em Ciências Veterinárias pela Universidade Estadual do Ceará (2009) . Atuando principalmente nos seguintes temas: Bodesinas, espermadesinas. 26/08/10

Antônia Sâmia Fernandes do Nascimento

Aluna do curso de Pós-graduação/Doutorado em Bioquímica Vegetal da Universidade Federal do Ceará (UFC). Possui graduação em Ciências Biológicas (2007) pela Universidade Estadual do Ceará (UECE) e mestrado em Biotecnologia (2010) pela UFC. Tem experiência nas áreas de bioquímica (isolamento e purificação de lectinas) e biologia molecular (clonagem e expressão de lectinas).

Luciana Magalhães Melo

Possui graduação em Medicina Veterinária pela Universidade Estadual do Ceará (2001), mestrado em Ciências Fisiológicas pela Universidade Estadual do Ceará (2004) e doutorado em Bioquímica pela Universidade Federal do Ceará (2007). Tem experiência nas áreas de Bioquímica e Biologia Molecular, com ênfase em reprodução e sanidade animal. Atualmente realiza pós-doutorado em Biotecnologia Molecular aplicada às Ciências Veterinárias através do Programa Nacional de Pós-doutoramento (PNPD) da CAPES. Professora colaboradora da disciplina de Biologia molecular do Programa de Pós-graduação em Ciência Veterinárias (PPGCV, curso nível 6, segundo avaliação da CAPES). Membro docente das comissões de Seminários em Tópicos Especiais e de Qualificação, do doutorado em Ciências Veterinárias do PPGCV. Coordenadora de Comunicações de Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões (SBTE).

Érica Souza Albuquerque

Graduanda em Medicina Veterinária na Universidade Estadual do Ceará (UECE). Atua na área de Biotecnologia aplicada à reprodução de pequenos ruminantes.

Gandhi Rádis-Baptista

Graduado em Farmácia Bioquímica pela Universidade de São Paulo (1993), é mestre em Tecnologia Bioquímico-Farmacêutica pela Universidade de São Paulo (1996) e doutor em Bioquímica pela Universidade de São Paulo (2001). Foi professor adjunto do Departamento de Bioquímica da Universidade Federal de Pernambuco (2005-2008). Atualmente é professor adjunto do Instituto de Ciências do Mar da Universidade Federal do Ceará. Tem experiência na área de Bioquímica, com ênfase em Biologia Molecular e Química de Proteínas. Os principais interesses de investigação compreendem: os polipeptídeos farmacologicamente ativos, provenientes de organismos marinhos e terrestres; os receptores celulares e seus ligantes; a interação molecular; a tecnologia do DNA recombinante; o diagnóstico molecular e seus insumos.

Vicente José de Figuêiredo Freitas

Vicente José de Figueirêdo Freitas é médico veterinário formado pela Universidade Estadual do Ceará e concluiu o doutorado em Sciences de La Vie - Université François Rabelais (Tours-França) em 1996. Atualmente é professor adjunto da Universidade Estadual do Ceará. Publicou vários artigos em periódicos especializados (nacionais e internacionais). Possui capítulos de livros e livros publicados. Recebeu diversos prêmios e/ou homenagens. Atualmente coordena quatro projetos de pesquisa. Atua na área de Reprodução e Transgênese Animal. Em suas atividades profissionais interagiu com centenas de colaboradores em co-autorias de trabalhos científicos. Sua produção científica e tecnológica está principalmente ligada aos termos: caprino, embrião, transgênese, superovulação, transferência de embriões e reprodução.

Benildo Sousa Cavada

Gradução: Agronomia (UFPel, 1976); Mestrado Bioquímica Vegetal (UFC, 1980); Doutorado Biquímica Vegetal (Universite Paul Sabatier, Toulouse-França, 1985); Área de Atuação: Biologia Estrutural (proteínas); Departamento de Bioquímica e Biologia Molecular da UFC

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Publicado

2012-03-18

Como Citar

Cajazeiras, J. B., Nascimento, A. S. F. do, Melo, L. M., Albuquerque, Érica S., Rádis-Baptista, G., Freitas, V. J. de F., & Cavada, B. S. (2012). Expression of recombinant buck (Capra hircus) spermadhesinin a prokaryotic system. Revista Brasileira De Biociências, 10(1), 60. Recuperado de https://seer.ufrgs.br/index.php/rbrasbioci/article/view/115603

Edição

v. 10 n. 1 (2012)

Seção

Artigos