Utilização de técnicas moleculares para avaliação da diversidade de bactérias fixadoras de nitrogênio presentes em solos cultivados do Rio Grande do Sul

Resumo

Bactérias diazotróficas presentes no solo são as principais fornecedoras de nitrogênio nos ecossistemas primários. Na biosfera, a fixação de nitrogênio é a principal maneira pela qual o suprimento desse composto é mantido e aumentado. Afixação de nitrogênio ocorre em uma ampla variedade de bactérias, desde Archaebacteria até Eubacteria. Todos os organismos fixadores possuem um gene nifH, o qual codifica a Fe-proteína, que é um dos componentes da nitrogenase. Esse gene tem sido bastante estudado através de abordagens envolvendo organismos não-cultiváveis, as quais fornecem uma visão mais completa da comunidade diazotrófica, do que as abordagens envolvendo organismos que podem ser cultivados. Neste trabalho, descrevemos uma metodologia nova para o isolamento e purificação do DNA total de comunidades bacterianas presentes em amostras de solos obtidas da rizosfera de milho, uma cultura amplamente cultivada em diversas regiões do Estado do Rio Grande do Sul e a amplificação direta do gene nifH, tendo como molde o DNA obtido dessas amostras, através da utilização de oligonucleotídeos especificamente projetados para esse gene. Também demonstramos que a técnica de SSCP é uma ferramenta poderosa para a avaliação das metodologias comumente utilizadas nos estudos da ecologia de comunidades microbiológicas baseados em PCR.